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糖化酶的制備
發布時間:2018-09-28   點擊次數:509次

糖化酶又稱葡萄糖淀粉酶,其作用方式不像α-淀粉酶那樣無作用次序,而是從底物鏈的非還原性末端開始,順次切下一個個葡萄糖單位,遇到分支處的α-1,6糖苷鍵時,可將α-1,6糖苷鍵切開,然后繼續作用α-1,4糖苷鍵,直到產物全部成為葡萄糖為止。但糖化酶對α-1,6糖苷鍵的作用速度遠不及對α-1,4糖苷鍵的作用速度,因此水解支鏈淀粉多的淀粉時,需延長水解作用時間或添加部分支鏈淀粉酶。
  我國糖化酶的生產主要由黑曲霉優良菌種經深層發酵精制提煉而成。本實驗利用黑曲霉具有多種活力較強酶系的特點,利用淀粉類物質為原料,獲得制備淀粉水解糖所需的糖化酶。

一、實驗材料

1. 菌種:黑曲霉(Aspergillus niger)

2. 儀器:潔凈工作臺、滅菌鍋、恒溫培養箱、高速冷凍離心機、高壓滅菌鍋

二、實驗步驟

實驗流程:保藏菌種®菌株活化及平板擴大培養®搖瓶培養

1.菌株活化及擴大培養

①制備PDA培養基:去皮馬鈴薯200g切成小塊,加水約500mL,煮沸30min,然后用紗布過濾,濾液加蔗糖20g,瓊脂20g。溶化后加水定容至1000mL,分裝于250ml錐形瓶中,121℃滅菌20min,自然pH。

②接種:取滅菌后PDA培養基倒平板,冷卻后,接種斜面保藏的黑曲霉菌種,28℃恒溫培養3d。

2.搖瓶發酵培養

①發酵培養基的制備:

玉米粉培養基:玉米粉30g,米糠5g,麩皮5g,加水1000ml,拌勻至無干粉又無結團,分裝于250 ml錐形瓶內,每瓶100ml, 自然pH,121℃滅菌20 min。

②接種與產酶培養:取培養72h的黑曲霉平板,用打孔器打孔制成菌片。每個錐形瓶中接種12片,放在恒溫培養箱中28℃培養96 h。

3.離心

將搖床培養4d的黑曲霉發酵液4層紗布過濾后離心(10000r/min,10min)除菌體,所得上清液即為糖化酶粗酶液。

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