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細胞培養入門
發布時間:2019-04-04   點擊次數:660次

所需設備和容器

超凈臺

生物安全柜

細胞培養箱

顯微鏡

各種size的細胞瓶、細胞皿,還有細胞培養板。請注意(細胞皿底部是要經過處理的喲,不然細胞無法貼壁。

相關知識

何為細胞培養?

細胞常規培養是在細胞房中進行,在超凈工作臺或生物安全柜中,把細胞處理好,根據需要加入細胞培養基,放入細胞培養瓶/皿或細胞培養板中,再放到帶有5% CO2 的37℃恒溫培養箱中培養。細胞就像花花草草,尤其是細胞株基本每天都要觀察、打理的哦!

培養的細胞從哪里來?

1.細胞株

簡單說就是買的或送的。

2.原代細胞

組織或血液中提取的。一般細胞株可以連續傳代,而原代細胞養著養著就掛了。

培養細胞的生長方式有哪些?

1.貼壁生長

必須貼附于支持物表面才能生長。見于各種腫瘤細胞等。(你把培養皿或培養瓶底朝上,細胞也不會掉下來。

2.懸浮生長

于懸浮狀態下即可生長,不需要貼附于支持物表面。見于各種造血系統腫瘤細胞等。

PS:

每代貼附生長細胞的生長過程分為:

1)游離期:細胞接種后在培養液中呈懸浮狀態,也稱懸浮期 。

2)貼壁期:細胞貼附于(膠原、玻璃、塑料、其他細胞等)。

3)潛伏期:細胞有省長活動而無細胞分裂。

4)對數生長期:細胞數隨時間變化成倍增長,活力十足,MAX適合進行實驗研究。

培養細胞需要怎樣的生長條件?

1.細胞的營養需要

2.細胞的生存環境

溫度:37℃

O2:95%

CO2:5%

PH:7.2-7.4

一定的滲透壓

3. 無污染

4.無毒

細胞完全培養基的組成有哪些?

基礎培養基:80-95%

血清:5-20%

碳酸氫鈉:2.0g/L

青、鏈霉素:各200單位/毫升

細胞傳代

Q1:何為細胞傳代?

細胞在培養器皿中生長一定時間后,被分開接種到新的培養器皿即為細胞傳代。

 

Q2:為什么要傳代?

簡單說就是“孩子”長大了,要“分家”!

細胞株在培養過程中數量會不斷增多,但是培養細胞的細胞瓶/皿的空間有限,就會導致細胞之間接觸過于緊密,會使得細胞增殖收到抑制,所以我們必須把其中一部分細胞轉移到別的細胞瓶/皿,讓細胞有足夠的生長空間。

 

Q3:什么時候傳代?

觀察培養基是否正常,細胞狀態如何,細胞密度如何,決定是否傳代。如培養基變黃,細胞長成致密單層等情況。

Q4:傳代方法有哪些?

1.懸浮生長細胞傳代

1)離心法傳代:離心1000轉/分去上清,沉淀物加新培養液后再混勻傳代。

2)直接傳代法:懸浮細胞沉淀在瓶壁上,將上清培養液去除1/2~2/3,然后用吸管直接吹打形成細胞懸液再傳代。

2.半懸浮生長細胞傳代

此類細胞部分呈現貼壁生長現象,但是貼壁不牢,可用直接吹打使細胞從瓶壁上脫落下來,進行傳代。

3.貼壁生長細胞傳代

采用胰酶消化法傳代。常用的消化液有0.25%的胰蛋白酶液。

 

靠技術“馴化”細胞

1) 嚴格無菌操作,多噴噴酒精,要是對滅菌的東西不放心,自己包自己送自己烘干。
2) 不要和別人共用試劑耗材,自己準備一套。
3) 有可能的話在拿到新細胞的時候做好支原體衣原體檢測。
4) 水浴鍋很臟,生化培養箱要是得手動加濕的話,盤里的水也會很臟,勤換 (滅菌水加進去)。
5) 晚上離開的時候建議給細胞房照紫外,超凈臺是用完就開紫外(記得照30min后關掉)。
6) 同一時間就你一個人在用細胞房在養細胞。

 

靠內心"感動"細胞

1) 自己的細胞自己養,血的教訓。
2) 在生物安全柜 (或者超凈臺),槍頭,血清管,血清,培養基,瓶子,培養箱都足夠好,并且細胞房有良好的衛生措施 (比如隔離服,手套,口罩,清潔,HEPA 等等) 且不違反操作原則的情況下,你其實很難污染。
3) 上述條件不完備的情況下,就要多注意無菌操作了:比如要用的東西提前拿到臺子里照啊 (不過這個其實也不大好,因為會擋住紫外線),使用前 SDS+酒精擦臺子,進出超凈臺一定要酒精擦手。
4) 少對細胞說話,多靠內心來感動它們 (是的! 心不誠是不可以的!)

養細胞就像打仗,知彼知己,百戰不殆!只有了解你養的對象,才能把它養好!

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