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微生物菌種管理的相關流程
發布時間:2019-05-05   點擊次數:254次

        1.1菌株的采集

        實驗室用菌種一是到國家法定機構采購,二是購買商業派生菌種,三是科研中菌種交流。不管是哪種來源,均統一采集。采集中嚴格按照規范執行。要求包裝可靠,采集迅速,不泄漏不污染。保證菌種合格和環境安全。采集中要有菌種傳代標識。選擇有資質的標準菌株的合格供應商,每批標準菌株必須附帶有供應商的合格證或檢測報告或說明書,來證明所采購的標準菌株是合格的。

        1.2標準菌株和驗收

        實驗室收到標準菌株,首先應進行符合性感官檢查,記錄菌株號和標準菌株來源途徑信息,確保溯源性清楚。同時還應記錄標準菌株名稱和數量、生產日期、接收日期和有無破損等情況。

        1.3凍干標準菌株的復活

        1.3.1開啟產品包裝:先用70%酒精棉擦拭外包裝,再打開使用。

 

        1.3.2復活:選擇合適的培養基和培養條件(根據菌種使用說明書,見附錄)進行復活。菌種的活化建議是在非選擇性瓊脂培養基上,除非特殊情況或特別推薦,一般不用液體培養基。凍干菌株的傳代次數不得超過5代,從標準菌株保藏中心購買的凍干標準菌株為第F0代。

        1.4工作菌株確認方法及依據

        用無菌接種環取上述培養物,在相應的培養基平板(營養瓊脂、大豆胰蛋白胨瓊脂)上或相應的細菌鑒別平板(如伊紅美藍、麥康凱、BP等上劃線分離單個菌落,置適宜條件下培養(若該類微生物為厭氧菌,則培養條件應為厭氧條件)。以同樣方法取真菌和酵母菌至SDA(薩布羅培養基)平板上或玫瑰紅鈉培養基平板上,電熱恒溫培養箱23~28℃下培養7d;培養后觀察是否具有典型的菌落狀態,然后挑取單一純菌落,進行革蘭染色、鏡檢,觀察其染色特征及菌體形態以確定菌種。

        1.5 污染處理

        假如在該平板上發現有其他菌落生長,則說明操作有污染或菌種不純。要將

該污染培養物做滅菌處理,尋找原因,重新分離挑選純菌落。

        1.6菌種保存

        所有菌種均由實驗室專人(雙人雙鎖)保存于冰箱或其它保存方式。要建立菌種登記臺帳,詳細記錄菌種采集、保管、制備、使用、處置情況;每一種菌種一定要有檢測鑒定報告(具體的的鑒定方法見菌種質量報告鑒定證書上的方法);

        具體菌種保存方法一般為:

        將復蘇后肉湯與滅菌甘油按15%甘油比例(肉湯8.5mL+甘油1.5mL)混合,低溫保存箱-30 ℃凍存,(可用2mL凍存管凍存多管),作為保藏儲備菌株F1代,也可使用商品化的菌種保存管。

        1.7菌種的傳代

        1.7.1標準菌株的復蘇:

        ① 菌種操作應在無菌條件下進行,防止雜菌污染。

        ② 每次使用和復蘇時只需將小珠在平板上滾動或置肉湯中培養。

        1.7.2標準儲備菌株每轉接一次須進行確認。(確認方法一般為他們各自*的形態,在鑒別培養基上的形態)

        1.7.3工作菌株轉接的方法:

        ①、配制營養瓊脂培養基(溶血性弧菌加3%氯化鈉 ),121℃高壓滅菌15分鐘后分裝在試管內,冷卻后備用。

        ②、在無菌條件下,用接種環挑取菌苔至新鮮試管上作“米”字形劃線接種,放置在36℃的電熱恒溫培養箱內培養24小時。

        1.7.4工作菌株的使用

        1.7.4.1內部質量控制:一個月一次陽性對照、培養基每批驗收;

        1.7.4.2外部質量控制:能力驗證、實驗室比對;        

        1.7.5工作菌株的期間核查

        1.7.5.1期間核查的頻率:每半年對使用標準菌株進行一次期間核查。

        1.7.5.2工作菌株期間核查的方法及依據:同工作菌株的確認一樣。

        1.7.5.3建立標準菌株期間核查記錄。

        1.8菌種的標識和使用期限:

        1.8.1標識:菌種代數的計算為干粉菌種為第0代,轉接一次加一代。具體標識為:例單增李斯特氏菌第0代,標識為DZ-0,代標識為DZ-01代有12支,則DZ-01-01、……、DZ-01-12;并標明日期:如2016.02.13這樣填寫。

        1.9 菌種的保藏

        1.9.1將試管內菌種放入低溫保存箱中2~8℃冷藏保存。

        1.9.2將傳代并經過培養后的菌種放入冰箱中2~8℃保存。每支保存菌種需標明菌名、標準編號、傳次、傳代日期。

        1.10菌種的銷毀

        1.10.1菌種使用后或超過貯存期的應進行銷毀。

        1.10.2需銷毀的菌種,應用高壓蒸汽(121℃)滅菌30分鐘。

        1.10.3滅菌后,再進行清洗和處理。

        1.10.4銷毀的菌種應做好記錄。銷毀時由化驗負責人監督銷毀,保管人員負責銷毀。

 

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