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厭氧菌的分離培養方法
發布時間:2019-05-21   點擊次數:506次

        厭氧菌在有氧的情況下不能生長。要培養厭氧菌,必須創造一個無氧的環境。通常用培養基中加入還原劑,或用物理、化學方法去除環境中的游離氧,以降低氧化還原電勢。如皰肉培養基、硫基乙酸鈉培養基,牛心腦浸液培養基等。
        常用的厭氧培養方法有許多,可根據實際情況選用。
        厭氧缸法 接種好標本的平板或液體培養基試管,可放入厭氧缸內培養,厭氧缸是普通的干燥缸,用物理化學的方法使缸內造成厭氧環境,從而將厭氧菌培養出來。
        厭氧袋(bio-bag) 即在塑料袋內造成厭氧環境來培養厭氧菌。塑料袋透明而不透氣,內裝氣體發生管(有BH2Na的碳酸氫鈉固體以及5%檸檬酸安瓿)、美蘭指示劑管、鈀催化劑管、干燥劑。放入已接種好的平板后,盡量擠出袋內空氣,然后密封袋口。先折斷氣體發生管,后折斷美蘭指示劑管,命名袋內在半小時內造成無氣環境。如不突變表示袋內已達厭氧狀態,可以孵育。

        厭氧手套箱(anaerobie glove box) 一個密閉的大型金屬箱,箱的前面有一個有機玻璃做的透明面板,板上裝有兩個手套,可通過手套在箱內進行操作,故名。箱側有一交換室,具有內外二門,內門通箱內先關著。欲放物入箱,先打開外門,放入交換室,關上外門進行抽氣和換氣(h2,co2,n2)達到厭氧狀態,然后手伸入手套把交換室內門打開,將物品移入箱內,關上內門。箱內保持厭氧狀態,也是利用充氣中的氫在鈀的催化下和箱中錢殘余氧化合成水的原理。該箱可調節溫度,本身是孵箱或孵箱即附在其內,還可放入解剖顯微鏡便于觀察厭氧菌菌落,這種厭氧箱適于作厭氧細菌的大量培養研究,大量培養基可放入作預還原和厭氧性無菌試驗。金屬硬壁型厭氧箱的抽氣、充氣、厭氧環境和溫度等均系自動調節。

        關于厭氧菌的分離培養方法及注意事項。
        (1)培養基的使用,應注意下列各點:
1)盡量使用新鮮培養基,2~4h內用完;
2)應使用預還原培養基,預還原24~48h更好;
3)可采用預還原滅菌法制作的培養基(用前于培養基中加入還原劑,如L-半胱氨酸、硫乙醇酸鈉、維生素C及葡萄糖等,盡可能使預還原劑處于還原狀態);
4)液體培養基應煮沸10min,以驅除溶解氧,并迅速冷卻,立即接種醫。學教育網搜集整理;
5)培養厭氧菌的培養基均應營養豐富,并加有還原劑與生長過激因子(血清、維生素K、氯化血紅素、聚山梨酯-80等)。
        (2)培養基的選擇:初次培養一般都使用選擇培養基和非選擇培養基。
1)非選擇培養基:本培養基使分離的厭氧菌不被抑制,幾乎能培養出所有的厭氧菌。常使用心腦浸液瓊脂(BHI)、布氏瓊脂(BR)、胰豆胨肝粉瓊脂(GAM)、胰胨酵母瓊脂(EG)、CDC厭氧血瓊脂等。
2)選擇培養基:為有目的選擇常見厭氧菌株,以便盡快確定厭氧的種類。

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