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蠟樣芽胞桿菌的確證實驗
發布時間:2019-05-31   點擊次數:315次

⒈染色鏡檢

        挑取純培養的單個菌落,革蘭氏染色鏡檢。蠟樣芽胞桿菌為革蘭氏陽性芽胞桿菌,大小為(1μm~1.3μm)×(3μm~5μm),芽胞呈橢圓形位于菌體中央或偏端,不膨大于菌體,菌體兩端較平整,多呈短鏈或長鏈狀排列。

⒉生化鑒定

        挑取純培養的單個菌落,進行過氧化氫酶試驗、動力試驗、硝酸鹽還原試驗、酪蛋白分解試驗、溶菌酶耐性試驗、V-P 試驗、葡萄糖利用(厭氧)試驗、根狀生長試驗、溶血試驗、蛋白質毒素結晶試驗。

⒊溶血試驗

        挑取純培養的單個可疑菌落接種于TSSB 瓊脂平板上,電熱恒溫培養箱30 ℃±1 ℃培養24h±2 h。蠟樣芽胞桿菌菌落為淺灰色,不透明,似白色毛玻璃狀,有草綠色溶血環或完全溶血環。蘇云金芽胞桿菌和蕈狀芽胞桿菌呈現弱的溶血現象,而多數炭疽芽胞桿菌為不溶血,巨大芽胞桿菌為不溶血。

⒋根狀生長試驗

        挑取單個可疑菌落按間隔0.5cm 左右距離劃平行直線于營養瓊脂平板上,

        30 ℃±1 ℃培養24 h±2 h。蕈狀芽胞桿菌形成根狀生長的特征。蠟樣芽胞桿菌菌株不具形成根狀生長的特征。

⒌蛋白質毒素結晶試驗

        取經電熱恒溫培養箱30 ℃±1 ℃培養24 h±2 h 并于室溫放置3 d~4 d 的營養瓊脂培養物少許于載玻片上,滴加蒸餾水混勻并涂成薄膜。經自然干燥,微火固定后,加甲醇作用30 s 后傾去,再通過火焰干燥,于載玻片上滴滿0.5%堿性復紅,放火焰上加熱(微見蒸氣,勿使染液沸騰)持續1 min~2 min,移去火焰,再更換染色液再次加溫染色30 s,傾去染液用潔凈自來水徹底清洗、晾干后鏡檢。觀察有無游離芽胞(淺紅色)和染成深紅色的菱形、正方形或其它形狀的蛋白結晶體。如發現游離芽胞形成的不豐富,應再將培養物置室溫2 d~3 d 后進行檢查。除蘇云金芽胞桿菌外其它芽胞桿菌不產生蛋白結晶體。

⒍溶菌酶耐性試驗

        用接種環取純菌懸液一環,接種于溶菌酶肉湯中,36 ℃±1 ℃培養24 h。蠟樣芽胞桿菌在本培養基(含0.001 %溶菌酶)中能生長。如出現陰性反應,應繼續培養24 h。巨大芽胞桿菌不生長。

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