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創傷弧菌的制備及鑒定
發布時間:2019-06-06   點擊次數:563次

       創傷弧菌屬革蘭氏陰性弧菌。在液體培養基中菌體大小為0.7*2-3μm,稍彎曲。在固體培養基中呈多樣性。有單鞭毛。培養特性:營養要求一般,MAX適生長溫度為30℃,兼性厭氧。在無NaCl及超過8%NaCl的培養基中不生長,可在0.5%NaCl及3%NaCl的蛋白胨水中生長,在含6%NaCl的蛋白胨水中生長良好。

         非冷凍樣品采集后應立即置7℃~10℃生化培養箱保存,盡可能及早檢驗;冷凍樣品應在45 ℃以下不超過15 min或在2℃~5℃不超過18 h解凍;如果樣品需要冷凍貯存,應在樣品中加等量緩沖甘油-氯化鈉溶液(液體樣品應加雙料),推薦貯存溫度為-70 ℃以下。
甲殼類,則應先在自來水中洗刷外殼并甩干表面水分,然后以無菌操作打開外殼,按上述要求取相應部分。
       以無菌操作取檢樣25 g(mL),加入3%氯化鈉堿性蛋白胨水225 mL,用旋轉刀片式均質器以8 000 r/min均質1 min,或拍擊式均質器拍擊2 min,制備成1:10的均勻稀釋液。如無均質器,則將樣品放入無菌乳缽中磨碎,然后放在500 mL的滅菌容器內,加225 mL 3%氯化鈉堿性蛋白胨水,并充分振蕩。魚類和頭足類動物取表面組織、腸或鰓。貝類取全部內容物,包括貝肉和體液;甲殼類取整個動物,或者動物的中心部分,包括腸和鰓。
        嗜鹽性試驗:挑取純培養的單個可疑菌落,分別接種于不同氯化鈉濃度的胰胨水,生化培養箱內36 ℃±1 ℃培養24 h,觀察液體混濁情況。創傷弧菌在無氯化鈉、8%氯化鈉和10%氯化鈉的胰胨水中不生長,在6%氯化鈉的胰胨水中生長旺盛。
氧化酶試驗:挑選純培養的單個菌落進行氧化酶試驗,創傷弧菌為氧化酶陽性。
涂片鏡檢:將可疑菌落涂片,進行革蘭氏染色,鏡檢觀察形態。創傷弧菌為革蘭氏陰性,呈棒狀或弧狀。
        挑取純培養的單個可疑菌落,轉種3%氯化鈉三糖鐵瓊脂斜面并穿刺底層,36 ℃±1 ℃培養24 h觀察結果。創傷弧菌在3%氯化鈉三糖鐵瓊脂中的反應為底層變黃不變黑,無氣泡,斜面顏色不變或紅色加深,偶爾斜面變黃。
        V-P試驗:以接種針由3%氯化鈉三糖鐵瓊脂斜面挑取少許培養物穿刺3%氯化鈉MR-VP培養基,36℃±1 ℃培養24 h,在加V-P試劑前應先觀察動力。沿穿刺線周圍呈擴散性生長為動力陽性。

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